Cas"ওয়ান-পট" দ্বৈত জেনেটিক্যালি পরিবর্তিত ফসল এক্সপ্রেসের জন্য সনাক্তকরণ অ্যাস
জেনেটিক্যালি পরিবর্তিত ফসলগুলি বিশ্বজুড়ে ব্যাপকভাবে রোপণ করা হয়েছে এবং জেনেটিক্যালি পরিবর্তিত ফসলের সুরক্ষা নিশ্চিত করতে অনেক দেশ ধীরে ধীরে তাদের নিয়ন্ত্রক পদক্ষেপগুলি উন্নত করেছে। দ্রুত এবং নির্ভুল অন-সাইট জেনেটিক সনাক্তকরণ পদ্ধতির বিকাশ কৃষি এবং বায়োসফটিটির জন্য অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ এবং জিনগতভাবে পরিবর্তিত পণ্যগুলি সম্পর্কে জনসাধারণের উদ্বেগ দূর করতে পারে।
এই সমীক্ষায়, গবেষণা গোষ্ঠীটি জেনেটিক্যালি পরিবর্তিত ফসলে সিএএমভি 35 এস এবং এনওএস জেনেটিক লক্ষ্যগুলির একযোগে সনাক্তকরণের জন্য দ্বৈত সিআরআইএসপিআর (এমআর-ডিসিএ পদ্ধতি) এর সাথে মিলিত একটি নতুন ওয়ান-পট প্রতিক্রিয়া -- মীরা দ্বৈত সনাক্তকরণ তৈরি করেছে, জেনেটিক্যালি পরিবর্তিত ক্রপগুলি সনাক্তকরণের জন্য একটি সহজ এবং দক্ষ সনাক্তকরণ পদ্ধতি সরবরাহ করে।
পরীক্ষামূলক পদ্ধতি
মিরা দ্বৈত পণ্যটি সিএএস 13 এ এবং সিএএস 12 এ দ্বৈত সিস্টেম দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয় দুটি স্বতন্ত্র সংকেত তৈরি করতে যা একে অপরের সাথে হস্তক্ষেপ করে না এবং তারপরে ফ্লুরোসেন্ট রঙটি একটি আলোকসজ্জা উপকরণ দ্বারা বা ডুয়াল-চ্যানেল রিডআউট অর্জনের জন্য দুটি টি লাইন সহ একটি পরীক্ষার স্ট্রিপ দ্বারা পড়া হয়। পুরো প্রক্রিয়াটি 35 মিনিটেরও কম সময়ের মধ্যে সম্পন্ন হয়, 20 টি অনুলিপি হিসাবে কম সনাক্তকরণের সীমা সহ।
(এমআর-ডিসিএ সিএএমভি 35 এস এবং এনওএস সনাক্তকরণের মূলনীতি)
পুরো পরীক্ষাটি তিনটি ধাপে বিভক্ত: এমআইআরএ পরিবর্ধন, সিআরআইএসপিআর প্রতিক্রিয়া এবং ফলাফলের ব্যাখ্যার দুটি পদ্ধতি।
সিএএমভি 35 এস জিনটি সিএএস 13 এ এর লক্ষ্য হিসাবে ব্যবহৃত হয় এবং এনওএস জিনটি সিএএস 12 এ এর লক্ষ্য হিসাবে ব্যবহৃত হয়। দুটি জোড়া মীরা প্রাইমার যথাক্রমে ডিজাইন করা হয়েছিল। সিএএস 13 এ সিস্টেমটি কেবল আরএনএকে স্বীকৃতি দেয়, সুতরাং ফরোয়ার্ড প্রাইমার অঞ্চলটি ডিজাইন করা হয়েছে, যা পরবর্তী প্রতিলিপি এবং সিএএস 13 এ সক্রিয়করণের জন্য একটি টি 7 প্রচারক রয়েছে। এনওএস জিনে একটি পাম যুক্ত করা হয়। উপরের সংযোজনগুলি নিশ্চিত করে যে সিএএস 13 এ এবং সিএএস 12 এ প্রোটিন উভয়ই তাদের নিজ নিজ সিআরআরএনএগুলিতে আবদ্ধ হতে পারে এবং দুটি সিস্টেমের মধ্যে কোনও হস্তক্ষেপ বা ক্রস-প্রতিক্রিয়া নেই।
পরীক্ষামূলক পরিস্থিতি
সংবেদনশীলতা এবং নির্দিষ্টতা
এমআইআরএ প্রতিক্রিয়ার ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা পরীক্ষা করার জন্য নমুনাটি একটি গ্রেডিয়েন্টে মিশ্রিত করা হয়েছিল। এটি পাওয়া গেছে যে 20 μL এর একটি নমুনা ঘনত্বের মধ্যে ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা এখনও সনাক্ত করা যেতে পারে। 20 μL এর ঘনত্ব অবশেষে পরীক্ষার জন্য নির্বাচন করা হয়েছিল।
(বিভিন্ন নমুনা ঘনত্ব এবং পরীক্ষার স্ট্রিপগুলি রঙ বিকাশ এবং তীব্রতার পরিমাণ নির্ধারণের গণনার জন্য ব্যবহৃত হয়)
এমআর-ডিসিএর সুনির্দিষ্টতার আরও মূল্যায়ন করার জন্য, গবেষণা দলটি নন-ট্রান্সজেনিক প্রাণী এবং অ-ট্রান্সজেনিক উদ্ভিদের মিশ্র নমুনা পরীক্ষা করেছে। ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে কেবল সিএএমভি 35 এবং এনওএসযুক্ত ট্রান্সজেনিক নমুনাগুলিতে উচ্চ ফ্লুরোসেন্স সিগন্যাল ছিল, যখন অন্যান্য নমুনার ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণের কাছাকাছি ছিল। এমআর-ডিসিএ একটি নির্দিষ্ট দ্বৈত-লক্ষ্য নিউক্লিক অ্যাসিড সনাক্তকরণ প্ল্যাটফর্ম হিসাবে ব্যবহার করা যেতে পারে।
24 ফসলের নমুনাগুলি এমআর-ডিসিএ দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিল। এর মধ্যে 1, 2, 15, 16, 21 এবং 22 টি সিএএমভি 35 এস প্রমোটারযুক্ত ট্রান্সজেনিক কর্ন। 7, 8, 23, এবং 24 হ'ল এনওএস টার্মিনেটরযুক্ত রোগ-প্রতিরোধী ট্রান্সজেনিক চাল। 3, 4, 11, 12, 13, 14, 17 এবং 18 হ'ল সিএএমভি 35 এস প্রমোটার এবং এনওএস টার্মিনেটরযুক্ত ট্রান্সজেনিক সয়াবিন।
(24 নমুনার পরীক্ষার ফলাফল)
দ্রুত প্রতিক্রিয়া
প্রতিক্রিয়া সময় সাইট সনাক্তকরণের একটি গুরুত্বপূর্ণ উপাদান। গবেষণা দলটি পর্যবেক্ষণ করেছে যে এফএএম এবং হেক্সের ফ্লুরোসেন্স সিগন্যালগুলি যখন প্রতিক্রিয়া সময় 10 মিনিট ছিল তখন ফ্লুরোসেন্স যন্ত্র দ্বারা সনাক্ত করা যায়। সিআরআইএসপিআর প্রতিক্রিয়ার সাথে মিলিত এমআরএ 15 মিনিটের পরেও হলুদ প্রতিপ্রভ পর্যবেক্ষণ করে।
(বিভিন্ন মীরা প্রতিক্রিয়া সময়ে ফ্লুরোসেন্স সিগন্যাল)
(বিভিন্ন এমআইআরএ প্রতিক্রিয়া সময় এবং তীব্রতা পরিমাপের গণনায় পরীক্ষার স্ট্রিপগুলির রঙ বিকাশ)
পরীক্ষামূলক উপসংহার
পরীক্ষামূলক ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে দ্বৈত এমআরএর ভাল সুনির্দিষ্টতা রয়েছে এবং সিএএমভি 35 এবং এনওএসের প্রশস্তকরণ পণ্যগুলি সঠিকভাবে পেতে পারে। সিএএস 13 এ এবং সিএএস 12 এ সিস্টেমগুলি একে অপরের সাথে হস্তক্ষেপ না করে স্বাধীনভাবে প্রতিক্রিয়া দেখায়। এমআর-ডিসিএ পরীক্ষাটি 35 মিনিটের কম তাপমাত্রায় 20 টি অনুলিপি সঠিকভাবে সনাক্ত করতে পারে, যা ক্ষেত্রের জিনগতভাবে পরিবর্তিত ফসলগুলি সনাক্ত করার ক্ষেত্রে দুর্দান্ত মূল্য রয়েছে।
নিবন্ধ তথ্য
জার্নাল নাম: 《অ্যাডভান্সড রিসার্চ এক্সপ্রেস জার্নাল
নিবন্ধের শিরোনাম: nell জেনেটিক্যালি পরিবর্তিত ফসলের এক্সপ্রেসের জন্য একটি উপন্যাস CAS13A/CAS12A-মধ্যস্থতা "ওয়ান-পট" দ্বৈত সনাক্তকরণ পার্সের বিকাশ
প্রভাব ফ্যাক্টর: 11.4
গবেষণা দল: ওয়াং জিয়াওফু, জেজিয়াং একাডেমি অফ এগ্রিকালচার সায়েন্সেস