স্ট্যাফিলোকোকাস হেমোলিটিকাস একটি গ্রাম-পজিটিভ কোগুলাস-নেতিবাচক ব্যাকটিরিয়াম যা হাসপাতালগুলিতে খুব সাধারণ। সাম্প্রতিক বছরগুলিতে, হাসপাতাল-অর্জিত সংক্রমণের উচ্চ ঝুঁকির কারণে উদ্বেগ বাড়ছে। স্ট্যাফিলোকোকাস হেমোলিটিকাস আরও ত্বকের সংক্রমণ, মেনিনজাইটিস, পেরিটোনাইটিস এবং এমনকি সেপসিস হতে পারে। ক্লিনিকাল ডায়াগনোসিসে বিলম্বগুলি স্বাস্থ্যের অবস্থার অবনতি ঘটাতে পারে, তাই স্ট্যাফিলোকোকাস হেমোলিটিকাসের দ্রুত নির্ণয়ের সুনির্দিষ্ট চিকিত্সার মূল চাবিকাঠি।
লিয়ানিয়াংং দ্বিতীয় পিপলস হাসপাতালের সেন্ট্রাল ল্যাবরেটরি বিভাগের অধ্যাপক জি তুওর গবেষণা গোষ্ঠী "অ্যানালিটিকা চিমিকা অ্যাক্টা" জার্নালে "এমআরএ-এলএফএসের সাথে ক্লিনিকাল নমুনায় স্ট্যাফিলোকক্কাস হেমোলিটিকাসের একটি দ্রুত এবং ভিজ্যুয়াল সনাক্তকরণ" একটি নিবন্ধ প্রকাশ করেছে, 6.২ এর প্রভাব ফ্যাক্টর সহ।
অধ্যয়নের ওভারভিউ
এই সমীক্ষায়, অধ্যাপক জি তুওর গ্রুপ এমভিএএ জিনের উপর ভিত্তি করে এমআরএ-এলএফএস দ্বারা স্ট্যাফিলোলিটিকাস হেমোলিটিকাস সনাক্তকরণের জন্য একটি পদ্ধতি স্থাপন করেছিল এবং দ্রুত রোগের সনাক্তকরণ অর্জনের জন্য পার্শ্বীয় প্রবাহের স্ট্রিপ এলএফএসের সাথে মিলিত মাল্টি-এনজাইম ধ্রুবক তাপমাত্রা দ্রুত নিউক্লিক অ্যাসিড পরিবর্ধন প্রযুক্তি এমআরএ ব্যবহার করে। পরীক্ষাটি 37 ডিগ্রি এ সঞ্চালিত হয়েছিল এবং ফলাফলগুলি 9 মিনিটের মধ্যে 0। 147 সিএফইউ/প্রতিক্রিয়া সনাক্তকরণ সংবেদনশীলতার সাথে সনাক্ত করা হয়েছিল। এমআইআরএ-এলএফএস সনাক্তকরণ পদ্ধতিটি ক্লিনিকাল নমুনাগুলিতে স্ট্যাফিলোকক্কাস হেমোলিটিকাসের স্থির-পয়েন্ট সনাক্তকরণের জন্য উপযুক্ত এবং পিওসি দ্বারা স্ট্যাফিলোকক্কাস হেমোলিটিকাস সনাক্তকরণের পদ্ধতিটি উপলব্ধি করে, যা আন্ডারজেড অঞ্চলে রোগের দ্রুত নির্ণয়ের জন্য এবং চিকিত্সার জন্য অত্যন্ত মূল্যবান। গবেষণা গোষ্ঠী 95 টি এলোমেলো ক্লিনিকাল নমুনা বিশ্লেষণ করতে এমআইআরএ-এলএফএস, কিউপিসিআর এবং traditional তিহ্যবাহী ব্যাকটেরিয়া সংস্কৃতি পদ্ধতি ব্যবহার করেছে এবং ক্লিনিকাল প্রয়োগযোগ্যতা নিশ্চিত করেছে।
গবেষণা পদ্ধতি
এমআইআরএ-এলএফএস পরীক্ষার একটি স্কিম্যাটিক ডায়াগ্রাম উপরে দেখানো হয়েছে। এই গবেষণায়, অ্যাম্পফিউচার বায়োটেকের ডিএনএ ধ্রুবক তাপমাত্রা র্যাপিড এমপ্লিফিকেশন কিট (কলয়েডাল সোনার পরীক্ষার স্ট্রিপ টাইপ) এবং নিউক্লিক অ্যাসিড সনাক্তকরণ পরীক্ষা স্ট্রিপ ব্যবহার করা হয়েছিল।
এমভিএএ জিনের প্রাইমার দৈর্ঘ্য ছিল 30-35 নিউক্লিওটাইডস, এবং পরিবর্ধন পণ্যটির দৈর্ঘ্য ছিল 100-350 বিপি, এবং মোট 6 জোড়া প্রার্থী প্রাইমারের নকশা করা হয়েছিল। স্ট্যান্ডার্ড স্ট্যাফিলোলিটিক স্ট্যাফিলোকক্কাস স্ট্রেনের জিডিএনএ এমআইআরএ বিশ্লেষণের জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল, প্রার্থী প্রাইমারগুলি স্ক্রিন করা হয়েছিল, এবং প্রশস্ত পণ্যগুলি 2% আগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস দ্বারা ভিজ্যুয়ালাইজ করা হয়েছিল।
(প্রশস্তকরণ পণ্যগুলি আগারোজ জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস ব্যবহার করে প্রদর্শিত হয়)
তারপরে তদন্তটি ফরোয়ার্ড প্রাইমার সিকোয়েন্স (16 বিপি পিছনে) অনুসারে ডিজাইন করা হয়েছে। প্রোবের 5 'প্রান্তটি এফআইটিসির সাথে লেবেলযুক্ত এবং 3' প্রান্তটি সি 3 লেবেলযুক্ত। প্রোবটিতে 31- অবস্থান নিউক্লিওটাইডটি টিএইচএফ দিয়ে 5 'প্রান্ত থেকে 30 বিপি এবং 3' প্রান্ত থেকে 15 বিপি দূরত্বে প্রতিস্থাপন করা হয়। নির্বাচিত বিপরীত প্রাইমারের 5 'প্রান্তটি বায়োটিনের সাথে লেবেলযুক্ত।
(ক্রস-ডাইমারের স্কিম্যাটিক ডায়াগ্রাম এবং প্রাইমার-প্রোব সংমিশ্রণের ক্রম পরিবর্তন)
এছাড়াও, স্ট্যাফিলোকক্কাস হেমোলিটিকাস দ্বারা এমআইআরএ-এলএফএস সনাক্তকরণের জন্য প্রতিক্রিয়া শর্তগুলি অনুকূলিত হয়েছিল। পরীক্ষাগুলি 2 মিনিটের ব্যবধানে 4-12 মিনিট থেকে 37 ডিগ্রি এ সঞ্চালিত হয়। ফলাফলগুলি 8 মিনিটের প্রতিক্রিয়া সময়ে প্রদর্শিত হয় এবং পরীক্ষার লাইনটি স্পষ্টভাবে দৃশ্যমান। এছাড়াও, পরীক্ষাটি 5 ডিগ্রি বিরতিতে 22-52 ডিগ্রি থেকে সঞ্চালিত হয়। Mi {7}} ডিগ্রি এমআইআরএ-এলএফএস সনাক্তকরণের জন্য সবচেয়ে উপযুক্ত তাপমাত্রা। অতএব, স্ট্যাফিলোকোকাস হেমোলিটিকাসের জন্য এমআইআরএ-এলএফএস পদ্ধতির অনুকূল প্রতিক্রিয়া সময় এবং তাপমাত্রা যথাক্রমে 8 মিনিট এবং 37 ডিগ্রি ছিল। চূড়ান্ত ফলাফলটি 1 মিনিটের মধ্যে এলএফএস দ্বারা ভিজ্যুয়ালাইজ করা হয়েছে এই সত্যের সাথে, মোট সনাক্তকরণের সময়টি 9 মিনিট।
(প্রতিক্রিয়া সময় এবং তাপমাত্রার অপ্টিমাইজেশন)
পরীক্ষামূলক ফলাফল
1 সংবেদনশীলতা যাচাইকরণ
স্ট্যাফিলোকোকাস হেমোলিটিকা সংস্কৃতিগুলির সিরিয়াল ডিলিউশন থেকে প্রাপ্ত জিনোমিক ডিএনএ (জিডিএনএ) এর বিভিন্ন ঘনত্ব (1 0^6-10^0 সিএফইউ/এমএল) এমআরএ-এলএফএসের জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল।
(বিভিন্ন ঘনত্বের ইতিবাচক সংকেত)
সম্ভাব্য ইউনিট রিগ্রেশন বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে এমআইআরএ-এলএফএস অ্যাস দ্বারা নির্ধারিত 95% এলওডি ছিল 0। 147CFU/প্রতিক্রিয়া।
(সনাক্তকরণ গণনার সীমা)
2। নির্দিষ্টতা বৈধতা
এমআইআরএ-এলএফএস সনাক্তকরণের নির্বাচনটি সাধারণ প্যাথোজেনিক অণুজীবের 18 টি স্ট্রেন এবং ক্লিনিকাল স্ট্যাফিলোকক্কাস হেমোলিটিকাসের 15 টি স্ট্রেন বিশ্লেষণ করে নির্ধারিত হয়েছিল। ফলাফলগুলি দেখিয়েছে যে এমআইআরএ-এলএফএস পরীক্ষাটি অন্যান্য 18 টি প্যাথোজেনিক ব্যাকটিরিয়ার জন্য নেতিবাচক ছিল এবং স্ট্যাফিলোকক্কাস হেমোলিটিকাসের 15 যাচাই করা ক্লিনিকাল নমুনার জন্য ইতিবাচক ছিল।
(স্ট্যান্ডার্ড প্যাথোজেনিক ব্যাকটিরিয়ার 8 টি স্ট্রেন এবং ক্লিনিকাল হিমোলিটিক স্ট্রেপ্টোকোকাসের 15 টি স্ট্রেন যথাক্রমে পরীক্ষা করা হয়েছিল)
এমআইআরএ-এলএফএস অ্যাসে উচ্চতর নির্বাচনীতা রয়েছে এবং এটি স্ট্যাফিলোকক্কাস হেমোলিটিকাসের স্ক্রিনিংয়ের জন্য উপযুক্ত।
3। প্রকৃত নমুনা পরীক্ষা
লায়ানিয়াংং দ্বিতীয় পিপলস হাসপাতাল থেকে এলোমেলোভাবে মোট 95 টি নমুনা সংগ্রহ করা হয়েছিল, এতে ত্বক এবং নরম টিস্যুগুলির 35 টি নমুনা, প্রস্রাবের 16 টি নমুনা, স্পুটামের 14 টি নমুনা এবং রক্তের 30 টি নমুনা রয়েছে।
(95 ক্লিনিকাল নমুনাগুলি বিভিন্ন পদ্ধতি দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিল)
ফলাফলগুলি দেখিয়েছিল যে সনাক্তকরণ পদ্ধতিটি কিউপিসিআর পদ্ধতির সাথে 100% সামঞ্জস্যপূর্ণ ছিল। তদতিরিক্ত, সোনার স্ট্যান্ডার্ড (জিবি/টি 4789। এই ফলাফলগুলি ক্লিনিকাল নমুনাগুলিতে স্ট্যাফিলোকক্কাস হিমোলিটিকাস সনাক্তকরণে পদ্ধতির প্রযুক্তিগত সম্ভাব্যতাটিকে আরও বৈধ করে তোলে।
এমআরএ-এলএফএস পদ্ধতিটি পিওসিটি দ্বারা স্ট্যাফিলোকক্কাস হেমোলিটিকাসের দ্রুত সনাক্তকরণের জন্য ব্যবহৃত হয়, যা দক্ষ, নির্ভুল, সহজ এবং ব্যয়বহুল, যা দ্রুত নির্ণয় এবং চিকিত্সার সিদ্ধান্তের জন্য সহায়ক।